中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域的原核表达及复性

作者：黄凰; 杨燕; 刘嘉; 张振华; 田拥军; 王宝菊; 郝友华; 杨东亮

来源：医学分子生物学杂志, 2006, (04): 255-259.

DOI：10.3870/j.issn.1672-8009.2006.04.003

• 旱獭
• 去唾液酸糖蛋白受体
• 基因治疗

目的对中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1和H2亚基糖基识别域(CRD)的克隆、表达、纯化及复性。方法用RTPCR从中国旱獭肝组织中扩增ASGPRCRDH1和CRDH2cDNA,分别将其克隆到原核表达载体pRSETB上,在埃希菌BL21(DE3)pLysS内诱导表达含6个组氨酸标签的融合蛋白。融合蛋白经Ni2+螯合柱亲和纯化后,在体外行透析复性。结果ASGPRCRDH1和CRDH2经原核表达后得到分子量约为22ku和15ku的目的蛋白,以包涵体形式存在。经Ni2+螯合柱亲和纯化后获得纯度大于95%的融合蛋白。利用仅识别天然构像的单克隆抗体对复性后产物进行检测,证明复性成功。结论成功地表达了具有活性的ASGPRCRDH1和CRDH2的融合蛋白,在肝脏疾病的靶向治疗研究中具有潜在的应用价值。

• 单位
  华中科技大学同济医学院; 华中科技大学同济医学院附属同济医院