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摘要
自幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,H.Pylori)被科学家发现以来，已经明确其与多种上消化道疾病密切相关，准确地检测H.Pylori是对疾病进行规范化治疗的前提。血清抗体检测法可以反映一段时间内H.Pylori感染状况，是唯一不受近期用药和胃内局部病变影响的检测方法。本研究制备了高纯度、具有生物活性的尿素酶B亚单位(Urease B,UreB)蛋白，并对该蛋白进行分析鉴定，建立一种间接ELISA法，用于检测患者由于感染幽门螺旋杆菌而产生的UreB抗体。利用PCR方法扩增出H.Pylori-UreB基因，然后进行双酶切、连接构建重组表达载体UreB-pTrcHis2C,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中，经IPTG诱导表达，利用金属离子螯合磁珠结合离子交换层析进行纯化，纯化后的蛋白通过Western Blot进行抗原反应性鉴定。将验证后的蛋白包被于酶标板中，建立间接ELISA法，用于检测患者血清中的UreB抗体。该蛋白在25℃条件下，以1 mmol/L IPTG,诱导4 h蛋白表达量最高，蛋白相对分子质量为69 000,纯化后蛋白纯度为97.3%,Western Blot结果显示，该蛋白与H.Pylori阳性血清可以发生特异性结合。通过棋盘滴定法确定了UreB蛋白的包被浓度和血清的稀释倍数，建立了间接ELISA法，并利用该方法对43例待测血清进行检测，间接ELISA结果与临床检测结果比较，准确度为88.4%,灵敏度为100%,特异性为82%。试验成功表达并纯化出高纯度的重组UreB蛋白，并利用该蛋白建立了一种检测患者血清中UreB抗体的间接ELISA法。
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