桃红四物汤诱导间充质干细胞动员促进骨折修复的机制

作者：曾朋; 陆小龙; 徐无忌; 向黎黎; 李汪洋^*; 熊辉^*

来源：湖南中医药大学学报, 2023, 43(12): 2163-2170.

• 桃红四物汤
• 骨折
• 骨折修复
• 间充质干细胞
• 动员

目的 探讨桃红四物汤（Taohong Siwu Decoction, THSWD）在骨折早期对骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）动员的影响。方法 将24只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、骨折组及药物组，每组8只。除正常组外，其余两组大鼠予右侧股骨干开放性骨折术造模。造模成功术后第1天，药物组大鼠予20 g/（kg·d）THSWD灌胃，正常组与骨折组的大鼠予等量蒸馏水。早、晚各1次，连续灌胃5 d。采用流式细胞术检测外周血CD45-CD90+CD29+单核细胞数目；通过流式细胞术进行表面标志物鉴定，镜下观察细胞形态，茜素红染色法、油红O染色法分别观察细胞成骨、成脂分化，以此鉴定外周血MSC来源；蛋白芯片检测骨折早期细胞因子的表达。结果 与正常组比较，骨折组大鼠外周血MSC绝对细胞数目、相对细胞数目增高（P<0.05），药物组外周血MSC绝对细胞数目、相对细胞数目显著增高（P<0.01）；与骨折组比较，药物组大鼠外周血MSC绝对细胞数目、相对细胞数目增高（P<0.05）。通过流式细胞术分析发现：THSWD干预大鼠骨髓来源的细胞中CD45-、CD90+、CD29+比例和CD45-中CD90+CD29+细胞比例分别为90.94%、98.57%、92.27%和94.15%；而THSWD干预的外周血来源的细胞CD45-、CD90+、CD29+比例和CD45-中CD90+CD29+细胞比例分别为90.59%、98.21%、92.03%和93.52%。通过镜下观察细胞形态，外周血MSC较骨髓MSC生长周期明显延长，细胞克隆数明显减少；细胞形态基本无明显区别；经过成骨成脂诱导后，茜素红和油红O染色发现，外周血MSC和骨髓MSC都能向成骨、成脂肪方向分化。与正常组比较，骨折组外周血中性粒细胞趋化因子-1(cytokine-induced neutrophil chemoattractant-1, CINC-1)和巨噬细胞炎性蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α, MIP-1α)蛋白表达增高（P<0.05）；与骨折组比较，药物组外周血CINC-1、CX3C趋化因子（fractalkine, FKN）、L-选择素（L-selectin）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）蛋白表达增高（P<0.05），白细胞介素-1α(interleukin-1α, IL-1α)蛋白表达降低（P<0.05）。结论 活血化瘀法的代表方THSWD干预骨折早期的大鼠能明显促进骨髓内MSC的动员，其分子机制可能与外周血CINC-1、FKN、L-Selectin、VEGF上调、IL-1α下调有关。

• 单位
  湖南中医药大学第二附属医院; 湖南中医药大学