编码大鼠ENPP1蛋白的cDNA克隆及重组腺相关病毒构建

作者：狄枫; 吴秀娟^*; 沈水娟; 郭波尧

来源：温州医科大学学报, 2021, 51(01): 13-18.

• 腺相关病毒
• 外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1
• 钙化
• 克隆
• 大鼠

目的:克隆编码大鼠外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ENPP1)的全长cDNA片段,构建ENPP1重组腺相关病毒载体(AAV-ENPP1)。方法:以大鼠血管平滑肌细胞mRNA为模板,通过RT-PCR扩增获得大鼠ENPP1基因大片段并克隆至pCDH载体中,经过EcoR I/Xho I酶切、连接、转化将该片段克隆至腺相关病毒载体pAAV-MCS中,酶切及DNA测序对阳性克隆进行鉴定。重组AAV-ENPP1经包装后转染目的血管平滑肌细胞,Western blot检测目的蛋白ENPP1的表达。结果:RT-PCR成功克隆出2 721 bp的大鼠ENPP1基因大片段,并最终获得测序正确的pAAV/ENPP1克隆,Western blot检测显示目的蛋白ENPP1的表达升高。结论:成功构建大鼠ENPP1重组腺相关病毒载体。

• 单位
  绍兴市人民医院