小鼠核糖核酸酶抑制剂异源高效可溶性表达、纯化及活性研究

作者：付大伟; 孙莹莹; 徐伟

来源：食品工业科技, 2019, 40(10): 174-183.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2019.10.029

• 核糖核酸酶抑制剂
• 融合标签
• 诱导表达
• 磁珠纯化

为获得高效可溶性表达的小鼠核糖核酸酶抑制剂(MRNI),本文通过构建含SUMO、IF2、GST、NusA、MsyB、Trx和MBP融合标签的重组表达载体,以大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌进行自诱导(auto-induction,AI)表达,利用MagNi磁珠检测及电泳分析MRNI的表达状况,并对其培养温度及时间进行优化,同时,与其他公司核糖核酸酶抑制剂(RI)活性进行对比。结果表明,重组菌BL21(DE3)(pNBEII-MRNI)诱导表达的可溶性融合蛋白IF2-MRNI的产量最高,最适诱导条件为37℃,诱导培养6 h,20℃培养24 h。磁珠纯化后获得的融合蛋白IF2-MRNI浓度为3621.3 mg/L,检测其酶活性约为40 U/μL。该酶具有抑制RNase A活性,防止RNA被降解的作用,为RI的生产及应用提供理论基础。

• 单位
  哈尔滨商业大学