基于LKB1-AMPK-TFEB的白术调节溶酶体自噬抗阿尔茨海默病作用机制

作者：吴丽敏; 赵洁; 张效威; 李中华; 王潘; 孙意冉; 张振强^*; 谢治深^*

来源：中国中药杂志, 2022, 47(17): 4723-4732.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20220304.701

• 白术
• 溶酶体自噬
• 阿尔茨海默病
• LKB1-AMPK-TFEB

淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)裂解后产生Aβ是阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)发生发展原因之一，该研究基于LKB1-AMPK-TFEB初步探讨白术(Atractylodes macrocephala,AM)降解APP抗AD作用机制。首先检测AM对AD转基因秀丽隐杆线虫CL2241记忆能力的影响，然后将APP质粒体外瞬转至小鼠神经瘤母细胞(N2a)中，设定空白对照组，APP组(模型组),阳性对照组(100μmol·L-1雷帕霉素),AM低、中、高剂量组(100、200、300μg·mL-1),ELISA法检测细胞培养基中Aβ1-42的分泌量；Western blot检测其对APP的降解作用，荧光显微镜分析APP荧光强度，荧光素酶报告基因法检测TFEB(transcription factor EB)的转录活性，RLuc-LC3wt/RLuc-LC3G120A检测溶酶体自噬活性，mRFP-GFP-LC3检测自噬通量，Western blot检测TFEB、LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、LAMP2、Beclin1、LKB1、p-AMPK、p-ACC的蛋白表达量，免疫荧光检测TFEB的表达，RT-PCR法检测TFEB及下游靶基因的表达。结果显示AM可显著降低转基因线虫CL2241的趋化指数，不同浓度的AM降低细胞上清中Aβ的分泌量，AM剂量依赖性降解APP的蛋白表达量及APP的荧光强度，AM处理后TFEB转录活性增强，LC3双标质粒荧光强度均增强，RLuc-LC3wt/RLuc-LC3G120A的值也显著降低，不同浓度的AM均可以促进TFEB、LAMP2及Beclin1的蛋白水平，剂量依赖性的升高LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的蛋白表达量比值，免疫荧光结果显示，AM促进TFEB的荧光强度及入核表达，RT-PCR结果显示各浓度的AM可提高APP转染的N2a细胞中TFEB的mRNA水平，剂量依赖性地促进LAMP2的转录水平，且高浓度的AM还可以显著提高LC3、P62的mRNA水平，不同浓度的AM升高LKB1、p-AMPK及p-ACC的蛋白水平。综上所述，白术调节自噬降解APP的机制与激活LKB1-AMPK-TFEB通路有关。

• 单位
  河南中医药大学