西门塔尔牛胰腺间充质干细胞原代培养及其多向分化潜能研究

作者：王育南; 吴月; 宋哈楠; 张涛^*; 关伟军^*

来源：畜牧兽医学报, 2022, 53(11): 3786-3796.

• 胰腺间充质干细胞
• 西门塔尔牛
• 原代培养
• 生物学特征
• 分化潜能

旨在对西门塔尔牛胰腺间充质干细胞(pancreatic mesenchymal stem cells, PMSCs)进行原代培养并研究其体外分化潜能，为细胞疗法和组织工程学方面提供新的种子细胞。本研究从3月龄的西门塔尔牛胚胎中无菌分离胰腺组织，分别采用胶原酶消化法和组织块贴壁法分离PMSCs,进行原代培养；绘制第3代、第9代、第15代细胞生长曲线并测定群体倍增时间及克隆形成能力，采用免疫荧光检测干细胞表面标志物(CD29、CD44、CD73、CD90、CD34和CD45),RT-PCR检测干细胞细胞表面标志物(CD29、CD44、CD73、CD90、CD106、CD166、CD34和CD45);染色体核型分析检测其基因稳定性，通过向成脂、成骨、成软骨和成肝样细胞诱导分化，检测其多向分化潜能。结果表明，两种方法都可成功分离出PMSCs,细胞贴壁后形态均为长梭形，漩涡状生长，生长趋势呈典型的S形；第9代细胞群体倍增时间显著低于第15代而高于第3代(P<0.01);第9代PMSCs克隆形成率显著低于第3代而显著高于第15代(P<0.05);免疫荧光结果表明，PMSCs特异性表达CD29、CD44、CD73和CD90,RT-PCR结果显示PMSCs特异性表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD106和CD166,未表达造血细胞表面标志物CD34和CD45,与国际细胞治疗学会组织干细胞委员会指定的MSCs表面标记物相对应；核型分析表明，PMSCs为正常二倍体(2n=60,XY),染色体基因组未发生变异；特异性染色和RT-PCR结果表明，从西门塔尔牛体内获得的PMSCs可分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞和肝样细胞。本试验证实两种方法均可成功建立西门塔尔牛PMSCs体外分离培养体系，PMSCs具有活性好、增殖速度快的特点，与MSCs有相似的生物学特性和多项分化的潜能。可为组织工程学提供新的种子细胞。

• 单位
  基础医学院; 佳木斯大学; 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所