摘要
目的构建SATB1的siRNA表达载体,并研究其对小细胞肺癌(SCLC)的作用。方法根据SATB1的DNA序列设计3对siRNA引物,构建携带绿色荧光的重组质粒SATB1-siRNA-1、SATB1-siRNA-2、SATB1-siRNA-N。应用lipofect2000将载体SATB1-siRNA-1、SATB1-siRNA-2、SATB1-siRNA-N转染入SCLC细胞NCI-H446中。转染48 h后应用Western印迹法检测转染后SATB1蛋白表达细胞增殖能力检测(MTT法)、Transwell小室、流式细胞仪检测NCI-H446细胞在转染前后的增殖能力、侵袭能力、凋亡的改变。结果成功的构建了SATB1基因的siRNA表达载体。转染SATB1-siRNA后的SCLC细胞内可见绿色荧光。转染SATB1-siRNA-1、SATB1-siRNA-2的NCI-H446细胞中其SATB1表达明显低于转染SATB1-siRNA-N及空白对照组的NCI-H446细胞中。MTT实验提示,转染SATB1-siRNA-1、SATB1-siRNA-2的SCLC细胞与转染SATB1-siRNA-N的同类细胞相比增殖能力受到明显抑制。Transwell结果显示转染SATB1-siRNA-1、SATB1-siRNA-2后的SCLC细胞穿膜细胞数较未转染的和转染SATB1-siRNAN组细胞明显减少。流式结果显示细胞凋亡率转染SATB1-siRNA-1和SATB1-siRNA-2的细胞均显著高于转染SATB1-siRNA-N和空白对照组细胞(P<0.05)。结论 SATB1-siRNA可抑制SCLC细胞的增殖及侵袭能力,并诱导其细胞凋亡,提示SATB1在人SCLC的转移中起着重要的作用。
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单位辽宁医学院附属第一医院