Akt/mTOR信号通路在乌司他丁减轻大鼠心肌细胞氧化应激损伤中的作用

作者：王宇霆; 周海燕; 滕辉

来源：中华麻醉学杂志, 2017, 37(05): 637-640.

• 胰蛋白酶抑制剂
• 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶
• 氧化应激
• 肌细胞
• 心脏

目的评价蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)信号通路在乌司他丁减轻大鼠心肌细胞氧化应激损伤中的作用。方法 H9c2心肌细胞以密度104个/孔接种于96孔板,采用随机数字表法分为5组:对照组(C组,n=12)、H2O2组(n=12)、H2O2+乌司他丁组(HU组,n=12)、H2O2+乌司他丁+LY294002组(HUL组,n=9)和H2O2+LY294002组(HL组,n=9)。H2O2组加入H2O2(终浓度200μmol/L),在培养箱孵育12 h;HU组、HL组和HUL组分别加入乌司他丁(终浓度50 U/ml)、LY294002(终浓度10μmol/L)、乌司他丁(终浓度50 U/ml)+LY294002(终浓度10μmol/L)孵育2 h,随后加入H2O2(终浓度200μmol/L),在培养箱孵育12 h。采用MTT法检测细胞存活率;采用水溶性四氮唑-1比色法和硫代巴比妥酸比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blot法测定细胞Akt、磷酸化Akt(pAkt)、mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)、活化caspase-3和活化聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)的表达水平。计算p-Akt/AKT比值、p-mTOR/mTOR比值。结果与C组比较,H2O2组细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,SOD活性降低,MDA含量升高,活化caspase-3和活化PARP表达上调(P<0.05),p-Akt/AKT比值、p-mTOR/mTOR比值差异无统计学意义(P>0.05);与H2O2组比较,HU组细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,SOD活性升高,MDA含量降低,p-Akt/AKT比值和p-mTOR/mTOR比值升高,活化caspase-3和活化PARP表达下调(P<0.05);与HU组比较,HUL组细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,活化caspase-3和活化PARP表达上调(P<0.05)。结论乌司他丁减轻大鼠心肌细胞氧化应激损伤的机制与激活Akt/mTOR信号通路有关。

• 单位
  浙江大学