3种介导猪NR2F2基因转染PK15细胞方法的比较研究

作者：张万锋; 黑伟; 何志强; 刘敏; 孟珊; 高鹏飞; 蔡春波; 杨阳; 郭晓红; 曹果清; 李步高^*

来源：中国畜牧兽医, 2020, 47(05): 1360-1367.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2020.05.008

• PK15细胞
• NR2F2基因
• 脂质体转染
• 电穿孔转染
• 慢病毒转染

试验旨在研究3种转染方法对猪肾上皮细胞(PK15)的转染效率,为以PK15细胞为模型研究外源基因的功能提供参考。本研究以PK15细胞为研究对象,用脂质体、电穿孔、慢病毒3种转染方法转染后,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,采用实时荧光定量PCR检测EGFP和NR2F2基因的表达情况,采用CCK-8检测细胞存活率,进而比较3种方法的转染效果。结果显示,转染PK15细胞后,电穿孔和慢病毒方法转染效率极显著高于脂质体(P<0.01),但电穿孔方法和慢病毒方法之间差异不显著(P>0.05);EGFP和NR2F2基因的实时荧光定量PCR结果显示慢病毒方法效果最好,脂质体方法较差,与细胞转染效率基本一致;CCK-8结果显示,电穿孔转染后细胞存活率最低,极显著低于对照组(P<0.01),脂质体方法显著低于对照组(P<0.05),慢病毒方法与对照组间差异不显著(P>0.05)。综合考虑转染效率及细胞活性,本研究认为慢病毒转染方法最适合转染PK15细胞,为今后高效转染PK15细胞提供了理想的方法。

• 单位
  动物科技学院; 山西农业大学