肺炎克雷伯菌外膜磷酸孔蛋白PhoE的生物信息学和免疫原性分析

作者：吴佳怡; 徐妮; 俞坚芸; 劳治承; 潘苑霞; 呼高伟^*

来源：中国兽医杂志, 2023, 59(06): 38-46.

• 肺炎克雷伯菌
• 外膜蛋白PhoE
• 生物信息学分析
• B细胞表位
• 免疫原性

为了探究肺炎克雷伯菌外膜磷酸孔蛋白(PhoE)的生物信息学特征和免疫原性，本试验通过在线服务器MultAlin分析不同肺炎克雷伯菌参考株的PhoE氨基酸序列保守性；通过ProtParam和SOMPA分析该蛋白的理化性质和二级结构；通过SWISS-MODEL进行PhoE同源建模；利用IEDB、DNASTAR软件预测该蛋白的优势B细胞抗原表位；通过质粒构建、重组蛋白表达和纯化获得PhoE重组蛋白，免疫接种小鼠后，应用Western blot和ELISA评价其免疫原性。氨基酸序列分析结果显示，PhoE是一种保守性较强的稳定亲水性蛋白质，其主要位于菌体外膜中；PhoE包含的α-螺旋、β-折叠和无规卷曲构成占比较大；并且其可形成三聚体的稳定桶形结构。经软件预测和筛选，PhoE具有7个优势性B细胞抗原表位，分别是Y43FSDYDSKDGDQT55、F81SGNKTESDSSQK93、Q172GKNEGREAKKQNGD186、S210DRTNDQNLLARGQGSKAE228、E249TRKMTPISGGFANKA264、K289GKDIEGVGSEDL301和I325NQLKSDNKLGINDD339。经PCR扩增获得了肺炎克雷伯菌CVCC4080株的phoE基因，与GenBank中其他肺炎克雷伯菌参考株的序列同源性均高于99.8%,PhoE经大肠杆菌表达后主要以包涵体的形式存在。ELISA和Western blot结果显示，PhoE具备良好的免疫原性。本试验通过生物信息学方法分析了肺炎克雷伯菌PhoE的理化特性，并通过试验证实了其具有良好的免疫原性，为PhoE的生物学功能研究、血清学检测方法的建立提供了数据支持，并为亚单位和表位疫苗的研制提供参考依据。

• 单位
  生命科学学院; 台州学院