NK细胞表面受体KIR2DS1 mRNA表达水平检测方法的建立

作者：王甜; 李颖; 胡星; 张环环; 陈璐瑶; 鲍晓晶; 史进方; 何军^*

来源：临床检验杂志, 2019, 37(11): 825-830.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2019.11.06

• 杀伤细胞免疫球蛋白样受体
• 激活
• 基因
• 定量
• 聚合酶链反应

目的建立检测NK细胞表面免疫球蛋白样受体基因KIR2DS1 mRNA表达水平的荧光定量PCR方法并评价其性能。方法以行异基因造血干细胞移植的供患者共57对为研究对象,针对KIR2DS1基因设计特异性引物及探针,构建TaqMan-MGB荧光定量PCR反应体系,并评价该实验方法的性能,包括:总符合率、重复性、灵敏度及仪器适用范围、技术人员再现性。结果以KIR-SSO基因定性分型法为金标准,通过检测其中35例样品,荧光定量PCR方法对KIR2DS1基因阳性及阴性检测率均为100%。在重复性试验中,选取Ct值分别为高、中、低值3个样品的批内、批间CV分别为0.09%～0.46%、0.71%～1.13%。该方法的灵敏度达102 copies/μL,且对拷贝数为102 copies/μL的3个样品进行5次重复试验的CV分别为5.37%、2.71%、5.51%。仪器比对结果显示,参比仪器ABI-7500与实验仪器LC-480之间的拟合直线回归方程为Y=0.973 6X+0.118 3(R2=0.961 9,R2>0.95)。2名技术人员对10个KIR2DS1基因阳性样品的再现性比对试验结果显示其偏倚(%)均<±5%。结论建立了TaqMan-MGB荧光定量PCR检测KIR2DS1 mRNA表达水平的检测方法,其性能良好。

• 单位
  苏州大学附属第一医院