茄匍柄霉LAMP快速检测体系的建立及应用

作者：谢学文; 刘世程; 石延霞; 张胜丰; 陈利达; 柴阿丽; 范腾飞; 李磊^*; 李宝聚^*

来源：农业生物技术学报, 2022, 30(10): 2045-2052.

• 茄匍柄霉
• 环介导等温扩增(LAMP)
• 快速分子检测

匍柄霉(Stemphylium solani)是一种重要的植物病原真菌，可侵染多种作物。环介导等温扩增(loopmediated isothermal amplification, LAMP)技术具有简便、准确、快速等突出优点，在病原菌检测领域有广泛应用。本研究以SYBR GreenⅠ为指示剂，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(glyceraldehyde-2-phosphate dehydrogenase, gpd)为检测靶标基因设计6条引物(2条内引物FIP/BIP, 2条外引物F3/B3,环引物LF25/LB25)进行LAMP扩增，同时通过环引物加速反应，建立了一套茄匍柄霉LAMP快速检测体系。特异性验证结果显示，仅16株茄匍柄霉有阳性扩增，具有较高的特异性。灵敏度检测结果显示，该检测体系灵敏度达2.4 pg/μL，显著高于普通PCR检测技术。环引物加速LAMP反应结果表明，加入环引物能使反应时间缩短至27 min，可有效加速LAMP反应。通过钙黄绿素进行显色反应，在自然光下仅模板为茄匍柄霉的反应液变为绿色，其余反应液均为橙色。采用该体系检测茄匍柄霉接种后番茄(Lycopersicon esculentum)叶片病原菌含量动态变化，接种病原菌12 h时，该体系即有阳性显色反应，接种后颜色随时间推移逐渐加深，与接种病原菌后叶片发病情况的规律相同。该反应结果不借助其他仪器即可观察，环引物加速反应使检测时间进一步缩短至27 min，能够快速、准确反应病原菌含量。该体系在匍柄霉快速检测方面具有较强的优势，可用于病害潜伏、未显症期的快速检测，对及时、科学防治茄匍柄霉叶斑具有重要意义。

• 单位
  中国农业科学院蔬菜花卉研究所; 徐州市贾汪区泰瑞农业科技有限公司