4种病原菌“单管一步法”PCR快速检测方法的建立

作者：潘雅君; 徐汪节; 彭丽娜; 乔中东; 王朝霞^*

来源：实验室研究与探索, 2021, 40(05): 68-72.

DOI：10.19927/j.cnki.syyt.2021.05.016

• 多重巢式PCR
• 肺炎克雷伯杆菌
• 金黄色葡萄球菌
• 嗜肺巴斯德杆菌
• 绿脓杆菌
• 小鼠

为了检测实验动物常见的4种条件性致病菌:肺炎克雷伯杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜肺巴斯德杆菌和绿脓杆菌,提出一种可更准确、灵敏、快速、简便的多重巢式PCR方法(MN-PCR)。根据待检微生物16S rDNA序列的保守区和可变区分别设计通用引物和特异引物,通过两种引物长短差异化创新设计,将模板富集和特异片段扩增两个过程整合为单个反应体系内的一步PCR反应。结果表明,MN-PCR方法能够在标准株DNA混合模板中同时扩增出4条待检测片段;而在阴性对照组中未检测出任何片段。MN-PCR方法在实际检测应用中能够成功检测出细菌感染阳性样本,且未扩增出其他微生物的特异性条带。建立的MN-PCR体系可以同时检测实验动物咽拭子等临床样本中的多种病原菌,与常规多重PCR方法相比,该方法具有特异性和灵敏度高、操作简便、节省时间等优点。

• 单位
  上海交通大学; 生命科学技术学院