敲低STOML2基因对前列腺癌细胞PC3增殖和迁移以及线粒体膜电位的影响

作者：李立坤; 张小军; 么安亮; 王勇; 刘健; 胡锦洋; 程代川; 曹凤宏^*

来源：医学研究生学报, 2020, 33(10): 1044-1050.

DOI：10.16571/j.cnki.1008-8199.2020.10.007

• 前列腺癌
• STOML2
• 慢病毒
• 增殖
• 迁移
• 线粒体膜电位

目的研究发现头颈鳞癌、甲状腺乳头状癌、胃癌、结肠癌等多种恶性肿瘤中Stomatin样蛋白2(STOML2)基因高表达。通过慢病毒技术敲低PC3细胞STOML2基因,观测其对列腺癌细胞增殖、迁移和线粒体膜电位及Erk和Akt通路的影响。方法用PEI法转染HEK293T细胞制作能敲低STOML2基因(shDNA-STOML2)及其随机序列对照(SHCON)的慢病毒,将其分别感染前列腺癌细胞PC3。以未转染前列腺癌细胞PC3为空白对照组,以转染随机序列为阴性对照组,以转染shDNA-STOML2慢病毒载体为敲低组。用免疫荧光显微镜和Western blot检测感染效率和STOML2蛋白表达水平。MTT实验、细胞划痕愈合实验检测对PC3细胞增殖和迁移的影响。流式细胞术及Western blot检测敲低STOML2基因后对PC3细胞线粒体膜电位以及Erk、Akt通路的影响。结果成功构建了shDNA-STOML2和随机序列SHCON两种慢病毒质粒。包装的慢病毒感染PC3细胞感染效率约100%,阴性对照组较敲低组的STOML2/β-actin相对表达水平明显升高(P<0.01),提示模型制作成功。与阴性对照组相比,敲低组在24、48、72 h的细胞活力(1.313±0.028、1.434±0.023、1.558±0.063)较阴性对照组(1.252±0.049、1.306±0.028、1.373±0.032)增加(P<0.05),24、48 h细胞体外迁移能力下降(P<0.05)。提示敲低STOML2基因可以让细胞增殖加速,但迁移能力降低。与阴性对照组相比,细胞线粒体膜电位升高(P<0.05);P-erk蛋白降低;Akt表达虽然降低,但P-Akt的增加(P<0.05)。结论敲低STOML2基因可以使PC3细胞增殖速度加快、体外迁移能力降低,可能与其增加PC3细胞膜电位、Akt通路被激活和Erk通路降低有关。STOML2基因可能在前列腺癌发生和转移过程中起着双重角色。

• 单位
  华北理工大学