猪圆环病毒2型感染树突状细胞外泌体中差异miRNA分析

作者：上官琳晖; 丁文文; 刘佳宇; 范阔海; 尹伟; 孙娜; 孙盼盼; 李宏全^*

来源：山西农业大学学报(自然科学版), 2023, 43(04): 54-64.

DOI：10.13842/j.cnki.issn1671-8151.202303002

• 猪圆环病毒2型
• 外泌体
• 微小核糖核酸
• 高通量测序
• 树突状细胞

[目的]本研究旨在探究猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2, PCV2）感染中，树突状细胞（Dendritic cell,DC）外泌体miRNA在调节免疫反应中的作用。[方法]以正常的单核细胞来源树突状细胞（MoDC）来源外泌体（DEX）为空白对照组，病毒感染的MoDC来源外泌体（VDEX）为试验组，使用间接免疫荧光评估感染模型鉴定外泌体后，通过高通量测序技术分析两者中的差异miRNA。[结果]间接免疫荧光结果显示，与PCV2共孵育的MoDC中有特异性绿色荧光，表明PCV2感染MoDC模型建立成功。纳米颗粒追踪技术结果显示，超速离心法提取的外泌体直径分别为130 nm和120 nm。Western blot结果显示，两组外泌体均存在特异性标记蛋白CD63和TSG101。高通量测序结果显示，与DEX组相比，VDEX组共504种miRNA发生显著变化（P<0.05），其中161种表达上调，343种表达下调。qPCR结果表明，与DEX相比，VDEX中ssc-miR-10b、ssc-miR-199a-3p-R-1、ssc-miR-532-5p、ssc-miR-425-5p、ssc-miR-210、ssc-miR-144-R+1、ssc-let-7c、ssc-miR-107-R-2、ssc-miR-22-5p-R-1和ssc-miR-296-3p-R+1表达量显著下降（P<0.05），与测序结果一致。GO分析显示，差异靶基因参与的生物学功能主要有转录调控（DNA模板）、RNA聚合酶Ⅱ对转录的正/负调控、信号转导和氧化还原等过程。KEGG通路分析发现，差异靶基因主要参与T细胞受体信号通路、Th17细胞分化通路、癌症通路、细胞内吞作用和腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路等。通过差异miRNA显著性P值、Fold-change和KEGG富集分析，最终确定出个10目标miRNA。[结论]VDEX中差异性表达的miRNA及其靶基因通过调控T细胞的增殖分化来调节免疫反应。

• 单位
  山西农业大学