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摘要
目的建立一种基于稳定元素标记和电感耦合等离子体质谱仪器的定量免疫分析方法, 将其应用于血清淀粉样蛋白A(SAA)检测, 并进行性能评价。方法以磁珠作为固相载体, 以元素钬(Ho)作为标记元素, 构建基于双抗体夹心法的免疫检测体系。对磁珠抗体结合比例、元素抗体用量、反应时间等因素进行优化, 确定检测体系最佳反应条件。根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)系列文件对检测体系进行方法学确认和性能验证, 具体包括空白检出限(LOB)、线性范围、准确度、特异性、不精密度、干扰实验等。最后收集免疫比浊法检测后SAA血浆样本82份, 采用新建检测体系进行检测, 并对二者的检测结果进行Pearson相关性分析。结果亲水性链霉亲和素和生物素化抗体最佳结合比例为1∶0.15, 元素标记抗体用量为3 μl, 两反应步骤孵育时间分别为40、30 min。新建检测体系LOB为0.6 μg/L, 在0～1 200 μg/L范围内线性相关性良好(R2=0.998 9, P<0.001), 高值样本与低值样本批内精密度分别为9.42%、7.95%, 批间精密度分别为14.56%、13.56%, 回收率为96.01%～104.76%, 与降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)交叉反应率分别为0.45%, 0.015%, 均<0.5%。当甘油三酯浓度≤35.5 mg/L、胆红素浓度≤0.52 mg/L、血红蛋白浓度≤2.4 g/L时, 检测的干扰偏倚均<10%。新建检测体系与免疫比浊法检测82份SAA血浆样本的结果分别为12.65(4.45, 59.03)、18.23(9.33, 68.72)mg/L, 相关性良好(R2=0.983, P<0.001)。结论本研究建立的以Ho为标记物的SAA定量免疫检测方法精密度高、准确度好、特异性高、线性范围宽, 可满足临床检测需求。
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