雷帕霉素靶蛋白反义RNA真核表达载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

作者：胡新华; 杨军; 张志深; 刘程伟; 李铁民; 张强

来源：中华实验外科杂志, 2006, (04): 537-539+641.

DOI：10.3760/j.issn:1001-9030.2006.04.008

• 雷帕霉素
• 表达载体
• 血管
• 平滑肌细胞 Rapamycin
• Expression vector
• Vascular
• Smooth muscle cell

目的构建雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的反义RNA真核表达载体,观察其对血管平滑肌细胞(VSMC)功能的影响。方法提取人VSMC总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增 mTOR基因cDNA序列,经pGEM-T载体克隆后双酶切,将cDNA序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGP-C1,转染VSMC,Western blot法检测反义表达载体对mTOR蛋白表达的影响,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果经RT-PCR获得664 bp产物,T载体克隆后,酶切确定该片段为 mTOR基因cDNA,进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-mTOR,测序证明序列正确后转染 VSMC,证实其能够...

• 单位
  中国医科大学附属第一医院