生物反应器培养BHK-21悬浮细胞增殖伪狂犬病病毒工艺优化

作者：王家敏; 李自良; 马芳芳; 康碧静; 田玲; 李倬; 马忠仁; 乔自林^*

来源：畜牧兽医学报, 2022, 53(11): 3936-3947.

• BHK-21悬浮细胞
• 生物反应器
• 伪狂犬病病毒
• 敏感性

旨在筛选伪狂犬病病毒(PRV)敏感的BHK-21细胞并分析其生长和病毒增殖特性，优化反应器中BHK-21悬浮细胞的培养和病毒增殖条件，建立生物反应器培养BHK-21悬浮细胞增殖PRV工艺。本研究利用响应面和单因素优化法，以细胞生长动力学特性、TCID50病毒滴度等参数为指标，优化1.2 L生物反应器中BHK-21悬浮细胞的最佳培养和增殖病毒条件，在5 L生物反应器中进一步批培养验证。结果显示，筛选获得PRV高敏感的BHK-21-02贴壁细胞和BHK-21-XF02悬浮细胞各1株，BHK-21-XF02悬浮细胞在含3%血清的SLM-BHK低血清培养基和SFM-BHK无血清培养基中均能实现良好的生长和病毒增殖。利用响应面法优化得到1.2 L反应器最佳培养条件为接种密度1.20×106cells·mL-1、搅拌转速120 r·min-1、DO值40%,5 L反应器批培养72 h细胞密度可达(7.61±0.18)×106 cells·mL-1、细胞活率为(96.93±1.18)%。利用单因素法优化得到1.2 L反应器最佳病毒增殖条件为MOI 0.001、培养温度37℃、细胞密度2.0×106cells·mL-1、搅拌转速80 r·min-1,5 L反应器批培养接毒后48 h病毒滴度达到最大值(7.13±0.11) lgTCID50·mL-1。本研究可为PRV疫苗相关研究和规模化生产提供参考。

• 单位
  西北民族大学; 四川大学; 生物治疗国家重点实验室