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摘要
目的 探讨WT1基因在骨肉瘤中的表达及其对细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 体外培养人成骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞MG-63细胞,Western blot法观察WT1蛋白的表达情况。体外培养MG-63细胞,分为siRNA-1组、siRNA-2组、阴性对照组(NC)组、空白对照组,分别转染WT1 siRNA-1、WTI siRNA-2及NC链,空白对照只加入转染试剂。转染后采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测siRNA-1组、siRNA-2组、NC组、空白对照组MG-63细胞WT1基因mRNA的表达情况,选择抑制效果好的siRNA-2组用于后续实验。将转染后的MG-63细胞分为siRNA-2组、NC组,CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞技术检测细胞凋亡率,比色法检测Caspase-3活性,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,Western blot法检测WT1、Bcl-2、MMP-2蛋白的表达水平。结果 Western blot法检测结果显示,骨肉瘤MG-63细胞中WT1蛋白的相对表达量1.29±0.14,明显高于成骨细胞hFOB1.19的0.23±0.07,差异有统计学意义(t＝6.603,P<0.01)。qPCR检测结果显示,骨肉瘤MG-63细胞转染后,siRNA-1组、siRNA-2组WT1 mRNA相对表达量均低于NC组和空白对照组,其中siRNA-2的抑制效果更显著,差异有统计学意义(F＝12.470,P<0.05)。根据此结果选择siRNA-2进行后续实验。转染siRNA-2后,CCK-8法检测结果显示,siRNA-2组光密度(OD)值为0.63±0.10,明显低于NC组的1.04±0.09,差异有统计学意义(t＝3.088,P<0.05)；流式细胞技术检测结果显示,siRNA-2组MG-63细胞凋亡率为5.10%±0.41%,明显高于NC组的2.57%±0.10%,差异有统计学意义(t＝4.014,P<0.05)；比色法检测结果显示,siRNA-2组细胞Caspase-3的相对活性为2.74±0.29,明显高于NC组的1.07±0.13,差异有统计学意义(t＝5.177,P<0.05)；Transwell小室法检测结果显示,siRNA-2组侵袭细胞为(75.0±9.5)个,明显少于NC组的(118.0±8.6)个,差异有统计学意义(t＝3.340,P<0.05)；Western blot检测结果显示,siRNA-2组WT1、Bcl-2、MMP-2蛋白相对表达量均明显低于NC组,差异均有统计学意义(t＝6.063、3.979、4.232,P值均<0.05)。结论 WT1在骨肉瘤细胞中高表达,靶向下调其表达水平可以抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力,诱导细胞凋亡,这可能与Bcl-2和MMP-2表达下调有关。
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