原核表达hbFGF结构与功能优化的研究

作者：孙奋勇; 潘秋辉; 余榕捷; 谢秋玲; 洪岸

来源：微生物学报, 2004, 44(4): 504-506.

DOI：10.3321/j.issn:0001-6209.2004.04.021

• 人碱性成纤维细胞生长因子
• 二硫键
• 定点突变
• 包涵体

野生型hbFGF蛋白可溶性与稳定性较低一直是困扰研发人员的难题.分析其氨基酸序列发现含有4个游离巯基,其中第78、96、101位半胱氨酸游离巯基可能直接影响其可溶性、稳定性及活性. 对天然hbFGF进行定点突变,一组将Cys78、Cys96同时突变,另一组将Cys78、Cys96与Cys101进行联合突变,均改为丝氨酸密码子,然后克隆入原核表达载体pET-3c,进行表达, 结果发现两种突变蛋白的可溶性大幅度增加,稳定性明显上升,其中三点突变的效果更为显著,但蛋白质的活性明显下降.可以认为78、96与101位半胱氨酸的游离巯基同时参与了天然hbFGF多聚体的形成,是导致野生型hbFGF可溶性与稳定性较低的主要原因,Cys101还与维持hbFGF的活性直接有关.

• 单位
  中山大学; 暨南大学