三叶因子3/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/核因子-κB在人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖和凋亡中的作用

作者：郭梦姚; 孙琳; 林旭; 张文静; 张静; 吴靖芳^*; 薛刚^*

来源：解剖学报, 2020, 51(04): 528-535.

DOI：10.16098/j.issn.0529-1356.2020.04.009

• 三叶因子3
• 磷脂酰肌醇3\|激酶/蛋白激酶B/核因子κB
• 甲状腺乳头癌
• 慢病毒转染
• 免疫印迹法
• 流式细胞术
• 实时定量聚合酶链反应
• 人

目的探讨三叶因子3(TFF3)对人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法构建TFF3基因过表达和敲低表达的慢病毒表达载体,包装293T细胞,产生慢病毒颗粒,病毒液转染TPC-1细胞,构建稳定增强TFF3表达的TFF3-TPC-1细胞系以及增强对照组细胞系ConT FF3-TPC-1;构建抑制TFF3表达的shRNA-TFF3-TPC-1细胞系以及沉默对照组细胞系shC on-TPC-1;利用Western blotting实验与Real\|time PCR验证TFF3过表达和沉默效率;生长曲线和集落形成实验检测4组细胞增殖状况;流式细胞术检测4组细胞凋亡情况; Western blotting和免疫细胞化学染色检测凋亡相关蛋白和磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、核因子-κB (NF-κB)通路蛋白表达水平。结果 1.成功构建TFF3过表达和抑制表达稳转细胞系TFF3-TPC-1及细胞系shRNA-TFF3-TPC-1; 2.TFF3-TPC-1细胞增殖能力和集落形成能力明显高于ConT FF3-TPC-1组(P<0.05或P<0.01),shRNA-TFF3-TPC-1细胞增殖能力和集落形成能力明显低于shC on-TPC-1组(P<0.01); 3.TFF3-TPC-1细胞凋亡率低于ConT FF3-TPC-1(0.75%±0.08%vs 5.62%±0.3%,P <0.01),shRNA-TFF3-TPC-1凋亡率高于shC on-TPC-1(22.2%±1.2%vs 5.34%±0.4%,P <0.01); 4.沉默TFF3基因后,Bax、细胞色素C (Cyt-C)、cleavedCaspase-9、cleaved-Caspase-3表达升高,Bcl-2、通路蛋白Akt、p-Akt、NF-κB-P65表达降低(P<0.05或P<0.01)。结论TFF3可能通过影响PI3K/Akt/NF-κB信号通路调节TPC-1细胞的增殖和凋亡。

• 单位
  河北北方学院