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摘要
目的研究吡非尼酮通过抑制JAK2表达对小鼠肺纤维化的作用及相关机制。方法本研究为实验研究。通过简单随机抽样的方法将30只8周雌性小鼠分为对照组、博来霉素组(雾化喷入博来霉素5 mg/kg)和吡非尼酮组(雾化喷入博来霉素5 mg/kg, 隔日1次吡非尼酮灌胃20 mg/kg), 每组10只。计算各组小鼠肺系数, 苏木精-伊红染色和Masson染色光镜下观察肺组织的病理变化, 并测定胶原含量, 蛋白质印迹法检测小鼠肺组织相关蛋白质水平, 荧光显微镜观察小鼠肺组织切片中p-JAK2、转化生长因子β1(TGF-β1)的免疫荧光信号强度和p-JAK2的定位, 酶联免疫吸附试验检测小鼠血清相关蛋白质水平。培养小鼠肺泡上皮细胞株MLE-12, 分为空白组、模型组(TGF-β1 10 μg/L)和干预组(TGF-β1 10 μg/L, 0.1、0.5、1和5 mmol/L吡非尼酮)。蛋白质印迹法检测MLE-12相关蛋白质水平, 荧光显微镜观察MLE-12细胞中p-JAK2的免疫荧光信号强度和定位, 蛋白质印迹法检测空白组、模型组和不同浓度LY2109761组(0.01、0.05、0.5 μmol/L LY2109761, TGF-β1 10 μg/L)相关蛋白表达水平, 检测空白组、模型组、si-NC组(转染阴性对照干扰小RNA, TGF-β1 10 μg/L)、si-JAK2组(转染si-JAK2, TGF-β1 10 μg/L)相关蛋白表达水平。结果博来霉素组小鼠肺系数高于对照组[(1.16±0.17)%比(0.78±0.07)%, P<0.001], 吡非尼酮组低于博来霉素组[(1.02±0.07)%比(1.16±0.17)%, P<0.05]。博来霉素组小鼠肺组织胶原含量高于对照组[(24.85±1.83)比(8.84±1.44), P<0.001], 吡非尼酮组低于博来霉素组[(9.42±3.07)比(24.85±1.83), P<0.01]。博来霉素组JAK2、p-JAK2、转化生长因子β受体2(TGF-βR2)、TGF-β1的表达水平均高于对照组[(0.37±0.02)比(0.15±0.01), (0.38±0.01)比(0.20±0.01), (0.88±0.03)比(0.14±0.01), (0.18±0.01)比(0.09±0.01), 均P<0.001], 吡非尼酮组均低于博来霉素组[(0.29±0.02)比(0.37±0.02), (0.28±0.01)比(0.38±0.01), (0.71±0.02)比(0.88±0.03), (0.09±0.06)比(0.18±0.01), 均P<0.01]。博来霉素组p-JAK2、TGF-β1免疫荧光信号强度均高于对照组, 吡啡尼酮组均低于博来霉素组(均P<0.01), p-JAK2免疫荧光信号多定位于细胞核内。博来霉素组小鼠血清肺表面活性蛋白A、涎液化糖链抗原和TGF-β1表达水平均高于对照组, 吡非尼酮组肺表面活性蛋白A、肺表面活性蛋白D、涎液化糖链抗原和TGF-β1表达水平均低于博来霉素组(均P<0.05)。模型组JAK2、p-JAK2、TGF-βR2的表达水平均高于空白组, 不同浓度干预组均低于模型组(均P<0.05)。随着培养时间的延长, 模型组MLE-12细胞中p-JAK2的免疫荧光信号逐渐增强, 且在细胞核和细胞质内均有定位。模型组JAK2、TGF-βR1、TGF-βR2的表达水平均高于空白组(均P<0.01), 不同浓度LY2109761组均低于模型组(均P<0.05)。模型组和si-NC组JAK2、TGF-βR2、TGF-β1的表达水平均高于空白组, si-JAK2组均低于si-NC组(均P<0.05)。结论吡非尼酮通过抑制JAK2表达减轻肺纤维化, 其机制可能是吡非尼酮通过TGF-β1抑制JAK2/STAT3信号通路, 并且减少p-JAK2直接入核参与信号转导。
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