基孔肯亚假病毒模型的建立及其在模拟检测中的应用

作者：刘大斌; 张昕; 安小平; 张宝中; 王盛; 周育森; 童贻刚

来源：生物技术通讯, 2010, (05): 641-645.

• 基孔肯亚病毒
• 假病毒
• 检测
• 实时荧光定量RT-PCR Chikungunya virus
• pseudo-virus
• detection
• real-time RT-PCR

目的:构建含基孔肯亚病毒核酸序列的重组慢病毒载体,以之转染细胞以分泌含基孔肯亚病毒核酸序列的假病毒,利用该病毒建立基孔肯亚病毒的模拟检测方法。方法:人工合成基孔肯亚病毒部分保守性核酸序列,连入慢病毒载体,构建含基孔肯亚病毒核酸序列的重组慢病毒质粒pLenti-chik,该质粒连同辅助质粒pLP1、pLP2、pLP/VSVG共转染293FT细胞;72 h后收集上清,用特异引物进行荧光定量RT-PCR检测。结果:建立了一个仅能进行一次复制、高度安全的基孔肯亚假病毒模型;同时采用荧光定量RT-PCR建立了较灵敏的检测病毒分泌的方法。结论:假病毒可以模拟基孔肯亚病毒分泌,但较真病毒安全性更高;用荧光定...

• 单位
  病原微生物生物安全国家重点实验室; 军事医学科学院