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摘要
目的探讨CD31内皮细胞抗体靶向荧光成像在肝段标记中的应用价值。方法采用免疫荧光法筛选具有快速结合特性的内皮细胞特异性抗体CD31,使用偶联荧光染料Alexa Fluor 647(AF647)定性及定量评价CD31抗体结合特性。采用体外内皮细胞染色分析CD31荧光抗体定位、半衰期及细胞毒性。单细胞悬液模型分析CD31抗体捕获效率。离体肝脏灌注模型分析CD31抗体灌注剂量及捕获效率的关系。荧光显微镜分析灌注肝段与非灌注区差异并定量分析荧光对比度。两组CD31抗体免疫荧光染色半最大效应浓度(EC50)比较采用t检验。结果抗小鼠CD31抗体能在10 s与内皮细胞快速特异性结合。定量分析显示,AF647荧光标记CD31抗体后仍具有快速结合特性;AF647荧光标记CD31抗体后孵育10 s和15 min,EC50值分别为(4.23±0.86)、(0.72±0.10)μg/ml,明显高于纯抗体的(1.21±0.24)、(0.32±0.07)μg/ml(t=5.877,5.928;P<0.05)。细胞染色显示CD31荧光抗体定位于细胞膜及细胞质,半衰期为5 h,无细胞毒性;单细胞悬液结合模型显示抗体捕获效率可达80%。体外灌注模型显示CD31荧光抗体可有效被血管内皮细胞捕获,捕获效率随着抗体浓度加大呈轻度下降趋势,灌注200 ng时捕获效率可达(47±8)%,灌注区域的荧光强度可达到非灌注区的(2.4±0.5)倍。结论 CD31内皮细胞抗体靶向荧光成像具有安全、有效、快速、特异性标记特点,是肝段标记的一种潜在应用方法。
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