带锚链的甲基对硫磷水解酶的基因构建及表达纯化

作者：刘立坚; 冷艳; 李雨亭; 谢卫红

来源：化学与生物工程, 2011, (07): 26-28+66.

• 甲基对硫磷水解酶
• 基因修饰
• 蛋白表达纯化 methyl parathion hydrolase
• genetic modification
• protein expression and purification

用PCR方法获得甲基对硫磷水解酶(MPH)编码基因,构建了重组表达质粒pET28a-mph-lc,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。当OD600达到0.5~0.6时,用终浓度0.4 mmol·L-1的IPTG在30℃下诱导表达5 h,破碎离心后,利用Ni-NTA亲和层析纯化得到具有活性的融合蛋白MPH-L,即在甲基对硫磷水解酶的C端连上了一段末端为半胱氨酸的锚链。

• 单位
  生物工程学院; 病毒学国家重点实验室; 中国科学院武汉病毒研究所; 湖北工业大学