SARS-CoV-2 δ变异株S抗原含量检测方法的建立及验证

作者：陈可芝; 钟子辉; 王笑天; 慕容健昌; 张梅; 赖文龙; 李东; 甘建辉; 刘萌萌^*; 刘建凯^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(04): 458-463.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003870

• 严重急性呼吸综合征冠状病毒2
• 灭活疫苗
• S抗原
• 酶联免疫吸附试验

目的 建立严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)δ变异株S抗原含量的检测方法，并进行验证。方法 采用δ变异株重组表达的受体结合域(receptor binding domain,RBD)蛋白分别免疫山羊和家兔，制备抗RBD多克隆抗体。以制备的两种抗RBD多克隆抗体为包被抗体和一抗，HRP标记的羊抗兔IgG抗体为酶标抗体，建立用于检测S抗原含量的双抗体夹心ELISA法。棋盘滴定法确定包被抗体和一抗，同时优化3种抗体稀释度。验证方法的准确性、精密性、线性范围及专属性。采用建立的方法检测SARS-CoV-2 δ株灭活疫苗(Vero细胞)原液及其中间品的S抗原含量。结果 兔抗RBD多克隆抗体及羊抗RBD多克隆抗体的效价分别为1∶32 000和1∶64 000，蛋白浓度分别为2.26和5.41 mg/mL。最佳包被抗体为羊抗RBD多克隆抗体，一抗为兔抗RBD多克隆抗体，包被抗体、一抗及酶标抗体最佳稀释度分别为1∶4 000、1∶8 000和1∶16 000。40、20、10 U/mL3种浓度S抗原内部参考品重复6次检测结果的回收率为83.5%～103.0%；重复6次测定3批SARS-CoV-2 δ株灭活疫苗(Vero细胞)原液抗原含量的CV均<7.5%,2名实验员对3批上述疫苗原液重复检测3次结果的CV均<7.5%;S抗原含量理论值在10～40 U/mL范围内，与测定值呈良好的线性关系，线性回归方程为：y=0.942 3 x+0.049 2,R2=0.995 4，定量限为10 U/mL；建立的方法与甲型肝炎灭活疫苗(人二倍体细胞)、四价流感病毒裂解疫苗、Vero细胞宿主蛋白、Vero细胞培养上清液等无交叉反应。SARS-CoV-2 δ株灭活疫苗(Vero细胞)原液及中间品3次检测结果的CV均<15.0%。结论 建立的双抗体夹心ELISA法具有良好的准确性、精密性、专属性，可用于SARS-CoV-2 δ株灭活疫苗(Vero细胞)原液及中间品中S抗原的定量检测。

• 单位
  深圳康泰生物制品股份有限公司; 北京民海生物科技有限公司