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摘要
目的 应用微滴式数字PCR技术(ddPCR)建立鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)外显子2密码子12/13多种突变类型一次性检测。方法 采用位点-参考探针法设计探针及引物，建立KRAS基因外显子2密码子12/13多位点突变反应体系，优化反应条件及退火温度，分析所建立方法的灵敏度和特异度，并进行实例验证。结果 成功建立KRAS基因多位点突变一次性检测的方法，并确立最佳退火温度为63℃。该方法特异度良好，灵敏度分析示最低检测限为0.5%,实例验证可应用于组织样本检测。结论 成功建立基于ddPCR技术KRAS基因外显子2密码子12/13突变检测方法，实现多位点突变一次性检测，其中仅需两类探针和一对PCR引物。
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