环形泰勒虫喀什株感染牛淋巴细胞系的建立及其生物学特征的鉴定

作者：马全英; 李有全; 刘军龙; 刘爱红; 王锦明; 赵帅阳; 陈银银; 徐建林; 殷宏; 关贵全^*; 罗建勋^*

来源：中国兽医科学, 2019, 49(02): 144-151.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0021

• 环形泰勒虫
• 细胞培养
• 牛淋巴细胞
• 细胞系

建立1株环形泰勒虫(Theileria annulata)感染的牛淋巴细胞系,分析其生物学特征,为环形泰勒虫病疫苗研发提供新的细胞系。用环形泰勒虫喀什株感染的小亚璃眼蜱成蜱叮咬健康黄牛,当动物体温升高,体表淋巴结肿大时,用显微镜检查肩前和股前淋巴结穿刺物涂片,出现裂殖体感染的淋巴细胞时,手术摘取淋巴结,无菌条件下进行淋巴细胞的分离培养;选择合适的培养条件对该细胞进行适应性传代培养,可稳定传代培养后,绘制细胞生长曲线,测定细胞倍增时间和细胞周期,测定细胞系环形泰勒虫18S rRNA基因序列,通过序列比对分析其亲缘关系。结果显示,建立了1株可传代培养的环形泰勒虫喀什株裂殖体感染的淋巴细胞系(TaKashi),接种5.0×105 mL-1的细胞,经72 h培养周期,细胞浓度可达到(2.8～3.0)×106mL-1,细胞存活率维持在90%以上;细胞群体倍增时间为33.4 h。细胞周期分析显示,G1期占46.2%,G2期占10.4%,S1期占43.4%,TaKashi传50代后仍然保持着淋巴细胞的形态学特征。18S rRNA基因序列比对及抗原基因Tams1同源性分析显示,该虫株与我国不同省份流行的环形泰勒虫虫株的相似性在91.9%以上,并处于同一个分支。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中农威特生物科技股份有限公司; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心