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摘要
目的：探讨Toll样受体3 (TLR3)激活对人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）移植治疗狼疮性肾炎（LN）的效果，并初步阐明其作用机制。方法：培养hUC-MSCs并鉴定，10 mg·L-1聚肌胞苷酸处理hUC-MSCs。45只MRL/Lpr雌性小鼠随机分为模型组、hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组，另取15只C57BL/6C雌性小鼠作为对照组；小鼠尾静脉注射hUC-MSCs或聚肌胞苷酸处理的hUC-MSCs。给药后，每2周测定1次小鼠24 h尿蛋白水平；8周后采血并取肾组织，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组小鼠血清中抗双链DNA (dsDNA)抗体水平和肾组织中肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素1β (IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)和白细胞介素17 (IL-17)水平。HE染色和PAS染色观察各组小鼠肾组织病理形态表现，免疫荧光染色检测各组小鼠肾组织中IgG和补体C3沉积。Western blotting法检测各组小鼠肾组织中蛋白激酶B (Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和自噬相关蛋白表达水平。结果：hUC-MSCs具有典型的间充质干细胞特征。与对照组比较，模型组小鼠血清中抗dsDNA抗体水平明显升高（P<0.05），肾组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17水平明显升高（P<0.05），肾组织中出现肾小球系膜细胞增生、肾小管萎缩坏死和炎症细胞浸润现象，肾组织中IgG和C3沉积明显（P<0.05），肾组织中Akt和mTOR蛋白表达水平明显升高（P<0.05），而微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）和酵母ATG6的同系物（Beclin1）蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与模型组比较，给药4周时TLR3+hUC-MSCs组小鼠24 h尿蛋白水平降低（P<0.05）,6和8周时hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组小鼠24 h尿蛋白水平均明显降低（P<0.05），血清中抗dsDNA抗体水平降低（P<0.05），肾组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17水平明显降低（P<0.05），肾组织病变有一定程度的改善，肾组织中IgG和C3沉积减少（P<0.05），且TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织改善更为明显；hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织中Akt和mTOR蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与hUC-MSCs组比较，TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织中LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：TLR3能够增强hUC-MSCs移植治疗小鼠LN的作用，可抑制肾组织炎症反应并调节细胞自噬水平。
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