salvinorin A上调MALAT1表达减轻缺血性脑卒中大鼠的脑血管内皮损伤

作者：丁俊云; 陈维英; **虹; 何振洲; 张依爵^*

来源：国际麻醉学与复苏杂志, 2020, 41(12).

• 脑卒中
• salvinorin A
• κ阿片受体
• MALAT1
• 脑血管内皮细胞
• 线粒体

目的研究κ阿片受体(κ opioid receptor, KOR)激动剂salvinorin A(SA)通过上调脑血管内皮细胞的长链非编码RNA (long noncoding RNA, lncRNA)MALAT1, 抑制线粒体分裂蛋白-1(dynamin-related protein 1, Drp-1)磷酸化, 减轻线粒体损伤, 产生对缺血性脑卒中大鼠的保护作用。方法动物实验采用雄性SD大鼠60只, 体重200～250 g, 按随机数字表法分为4组(每组15只):假手术组(S组), 大鼠不做任何干预, 只分离一侧颈内动脉;大脑中动脉栓塞模型组(MCAO组), 采用线栓阻断大鼠一侧颈内动脉90 min, 拔出线栓进行再灌注;salvinorin A组(SA组), 线栓放入即刻经尾静脉给予大鼠SA (20 μg/kg);KOR拮抗剂组(NB组), 注射SA前30 min给予大鼠KOR拮抗剂norbinaltorphimine(norBIN 2 mg/kg), 其余处理同SA组。大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)后24 h用Bederson评分法评估大鼠脑梗死程度。每组取5只处死取材, 2, 3, 5-三苯基氯化四氮唑(2, 3, 5-Triphenyltertrazolium chloride, TTC)染色测定缺血区脑梗死面积、伊文蓝检测血脑屏障通透性。MCAO后1、2、5 d行运动神经功能评分。离体实验采用人脑血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cell, HBMEC)缺糖缺氧(oxygen-glucose deprivation, OGD)模型, 分为5组:空白对照组(Blank组), 不进行缺氧及复氧处理;OGD组(A组), 缺氧6 h, 复氧24 h; SA+OGD组(B组), OGD模型复氧前1 h加入SA(5 μmol/L);MALAT1特异性小干扰RNA(specific small interfering RNA, siRNA)+OGD组(C组), 加入100 nmol/L lncRNA MALAT1 siRNA 24 h, 缺氧6 h, 复氧24 h; MALAT1 siRNA+OGD+SA组(D组), 复氧前1 h加入SA(5 μmol/L), 其余处理同C组。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)测定HBMEC活力、磷酸化Drp-1(phosphorylated Drp-1, pDrp-1 )/Drp-1、活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平, 电镜下观察线粒体形态。结果动物实验显示, 与S组比较, MCAO组大鼠Bederson评分增高, 脑梗死面积和伊文蓝渗出增加, 运动神经功能下降(P<0.05 );与MCAO组比较, SA组大鼠Bederson评分降低, 脑梗死面积减小, 伊文蓝渗出减轻, 运动神经功能改善(P<0.05 );与SA组比较, NB组大鼠Bederson评分增高, 脑梗死面积和血管通透性增加, 神经功能减退(P<0.05 )。离体实验显示, 与Blank组比较, A组MALAT1水平增加, HBMEC活性下降, pDrp-1/Dpr-1升高(P<0.05), ROS含量增加(P<0.01), 电镜下可见线粒体形态破坏;与A组比较, B组MALAT1水平增加, HBMEC活性增加, pDrp-1/Dpr-1下降(P<0.05), ROS含量下降(P<0.01), 线粒体形态趋于正常;与B组比较, C组HBMEC活性下降(P<0.05), pDrp-1/Dpr-1和ROS含量增高(P<0.01), 线粒体形态破坏;与C组比较, D组HBMEC活性增加, pDrp-1/Dpr-1、ROS含量降低(P<0.05 ), 线粒体仍有一定程度的肿胀。结论 KOR激动剂SA通过上调MALAT1的表达, 减轻缺血性脑卒中后脑血管内皮细胞线粒体的损伤, 减轻HBMEC的氧化应激反应, 减轻脑卒中后血脑屏障的渗透增加, 对脑卒中后的脑功能产生保护作用。

• 单位
  上海交通大学医学院附属仁济医院