虎杖PcMYB1启动子的克隆及其活性分析

作者：林艳丽; 覃建兵; 伍翔; 王岩岩; 潘佑找; 柳忠玉^*

来源：生物技术通报, 2021, 37(05): 48-55.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-1319

• 虎杖
• PcMYB1
• 启动子
• 序列分析
• GUS活性

获得药用植物虎杖(Polygonum cuspidatum)PcMYB1启动子,并分析其活性,为进一步研究虎杖转录因子PcMYB1的功能奠定基础。通过hiTAIL-PCR方法,从虎杖叶片基因组DNA中克隆PcMYB1启动子并进行生物信息学分析。分别构建由全长启动子或5’端缺失启动子驱动GUS的重组表达载体P1∷GUS、P2∷GUS、P3∷GUS和P4∷GUS。将重组表达载体转入发根农杆菌中进行虎杖毛状根转化试验,以转化的阳性毛状根为材料,通过GUS组织化学染色分析启动子的活性。成功获得2 884 bp的PcMYB1启动子序列(GenBank登录号MT811057)。该启动子具有真核生物启动子必需的核心元件TATA-box和CAAT-box,还含有茉莉酸甲酯和低温响应元件以及光响应、厌氧应答等相关的顺式调控元件。重组表达载体经PCR鉴定,证实已构建成功。转化的虎杖毛状根染色之后显蓝色,但同对照相比颜色较浅,说明全长启动子或5’端缺失启动子都具有驱动GUS的活性,但启动活性都比CaMV35S启动子的启动活性弱。PcMYB1的启动子被成功克隆,其具有驱动下游GUS表达的活性。

• 单位
  生命科学学院; 长江大学