流产嗜衣原体TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立

作者：保雨; 聂福平; 王昱; 杨俊; 袁曾壮; 叶自霞; 刘亚娟; 张姜琳; 吴蕊; 田郡; 王国民; 刘力; 李应国

来源：中国预防兽医学报, 2015, 37(07): 536-540.

• 流产嗜衣原体
• TaqMan-MGB
• 荧光定量PCR

为建立一种快速、准确检测流产嗜衣原体(C.abortus)Taq Man-MGB荧光定量PCR方法,本研究根据C.abortus主要外膜蛋白基因的特异保守序列设计引物及探针,并优化反应条件,建立了检测C.abortus的荧光定量PCR方法。结果表明,以重组质粒为标准品建立的标准曲线在1.6×103拷贝/μL1.6×107拷贝/μL内具有良好的线性关系,相关系数为0.9999。该方法仅对C.abortus的靶基因扩增呈阳性,而对鹦鹉热嗜衣原体、家畜嗜衣原体、鼠衣原体、沙眼衣原体、肺炎嗜衣原体、猪源衣原体核酸扩增结果均为阴性,特异性强;其最低检出限为1.6拷贝/μL;组内和组间重复性试验变异系数均小于3%,具有良好的重复性。利用建立的方法和普通PCR方法同时对225份临床样品进行检测,结果显示荧光定量PCR检出率比普通PCR高4.5%,表现较高的灵敏度和准确性。本研究建立的方法对C.abortus的临床鉴别检测和疾病诊断具有重要意义。

• 单位
  西南大学; 重庆出入境检验检疫局; 动物科技学院; 重庆大学; 生物工程学院; 重庆理工大学