人尿液蛋白质N-糖肽富集和质谱鉴定的新方法研究

作者：黄俊杰; 焦丰龙; 王和平; 朱丽华; 秦伟捷; 钱小红

来源：质谱学报, 2018, 39(02): 149-157.

• 巯基-烯点击化学法
• 尿蛋白
• N-糖肽
• 富集
• 质谱鉴定

蛋白质的N-糖基化修饰参与了许多重要的生理过程,是研究多种重大疾病诊断标志物的热点。与其他体液活检样本相比,尿液可以无创、大量获取,并且不受稳态调节的影响,能够在一定程度上反映整个机体的生理和病理状态。因此,人尿液蛋白质N-糖基化的规模化研究对疾病诊断标记物的筛选和治疗靶点的发现均具有重大意义。由于人尿液中的N-糖蛋白含量有限,修饰比例较低,在质谱分析时N-糖肽易被高丰度的非糖肽所掩盖,难以鉴定。因此,发展高效、高选择性的富集材料是实现尿蛋白N-糖基化深度覆盖的必要前提。本研究利用巯基-烯点击化学反应,使用[3-(甲基丙烯酰氨基)丙基]二甲基(3-硫代丙基)氢氧化铵内盐(SPP)制备了两性离子修饰亲水硅胶材料(SPP-SiO2)。该材料成功地应用于标准糖蛋白和健康人尿蛋白N-糖肽的富集和质谱检测,共鉴定了包含1 065个位点的633个尿液糖蛋白,比文献报道的鉴定规模提高了12.2%,证明了该亲水材料在尿液糖蛋白质组研究中的应用潜力。

• 单位
  北京蛋白质组研究中心; 基础医学院; 华北理工大学; 军事医学科学院放射与辐射医学研究所; 蛋白质组学国家重点实验室