嗜酸乳杆菌推定的β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的功能性表达

作者：潘渠; 胡福泉; 陈恬; 邱岳; 王广科; 李晋川

来源：成都医学院学报, 2009, (02): 86-90.

• 嗜酸乳杆菌
• β-半乳糖苷酶
• 克隆表达
• His-Tag
• 复性

目的在大肠杆菌中诱导表达以嗜酸乳杆菌克隆β-半乳糖苷酶基因lacZ,为研究其酶学特性做准备。方法从嗜酸乳杆菌ATCC4356中克隆lacZ基因,并构建表达载体pET22b-lacZ-H、pQE31-H-lacZ和pQE31-lacZ,然后在大肠杆菌中诱导表达,并测定表达产物的β-半乳糖苷酶活性。结果无标签的重组嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶LacZ获得了功能性表达,表达量可达2.28kU/L.而融合His-Tag的重组嗜酸乳杆菌LacZ却失去了β-半乳糖苷酶活性,即使复性也不能恢复。结论克隆表达的成功为该酶的酶学性质研究和可能的应用打下了基础。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 成都医学院