连翘叶片原生质体分离及瞬时转化

作者：赵峥畑; 张晓璐; 程堂仁; 王佳; 张启翔; 潘会堂^*

来源：西北农林科技大学学报(自然科学版), 2023, 51(04): 130-146.

DOI：10.13207/j.cnki.jnwafu.2023.04.015

• 原生质体分离
• 连翘叶片
• 瞬时转化
• GFP

【目的】研究高效分离连翘叶片原生质体的条件，并以PEG介导进行瞬时转化，为连翘基因的同源表达提供技术。【方法】以金叶连翘(Forsythia koreana‘Suwon Gold’)组培苗幼嫩叶片为材料，采用4因素3水平L9(34)正交试验，分析纤维素酶质量浓度(15,20,25 g/L)、离析酶质量浓度(3,5,7 g/L)、甘露醇浓度(0.2,0.4,0.6 mol/L)及酶解时间(5,7,9 h)对原生质体分离的影响，探索最优酶解条件，并在此条件下分离原生质体，之后以PEG介导转化pSuper1300::GFP质粒，研究其遗传转化效果。【结果】L9(34)正交试验结果显示，不同处理的金叶连翘叶片原生质体产量为1.17×106～5.71×106 g-1,影响最大的因素为离析酶质量浓度，且4个因素对产量均有极显著影响；原生质体活力为81.19%～90.69%,影响最大的因素为离析酶质量浓度，且其对活力的影响达到显著水平。最佳酶解条件为：在20 g/L纤维素酶、5 g/L离析酶、0.2 mol/L甘露醇的混合液中酶解9 h,在此条件下原生质体产量为5.57×106 g-1,活力为86.79%。PEG介导法结果显示，以GFP为报告基因，在转化后的金叶连翘原生质体中可以检测到绿色荧光信号。【结论】获得金叶连翘叶片原生质体分离的最佳条件，且在此条件下原生质体产量、活力较高，能够成功进行瞬时转化。

• 单位
  国家花卉工程技术研究中心