整合素αvβ3特异性结合肽的筛选及初步鉴定

作者：李雪松; 吴虹晔; 熊燕; 李晓武; 董家鸿

来源：第三军医大学学报, 2009, 31(22): 2272-2274.

DOI：10.3321/j.issn:1000-5404.2009.22.031

• 整合素αvβ3
• 噬菌体肽库
• 结合肽
• 淘选

目的应用噬菌体随机肽库展示技术筛选能与整合素αvβ3分子具特异性结合功能的小肽分子,并对其功能进行初步鉴定。方法根据整合素αvβ3分子细胞外配体结合区域的晶体结构及蛋白质序列设计①～⑤号5条短肽,并作为筛选配基,分别经过3轮"吸附-洗脱-扩增"后,ELISA鉴定阳性克隆,DNA测序和分析,粘附试验进一步分析化学合成多肽的功能。结果经3轮亲和筛选后,噬菌体克隆得到有效富集,以⑤号肽为代表,ELISA鉴定显示7个阳性克隆能与⑤号合成短肽有较强结合活性。进行DNA测序,多重序列分析获得2个多肽基序:****HRH,HWR****。粘附试验表明化学合成多肽FITC-HLPWHRH,FITC-HWRLHPH与表达整合素αvβ3的细胞株具有一定的亲和性,且结合能被αvβ3分子配体纤维连接蛋白所抑制。结论通过噬菌体随机展示肽库技术在体外对合成的短肽进行筛选,可以获得与整合素αvβ3分子具特异性结合能力的小肽分子。

• 单位
  解放军总医院; 第三军医大学西南医院