增强型绿色荧光蛋白的色谱分离和纯化

作者：侯清华; 宋淑亮; 梁浩; 王伟莉; 吉爱国

来源：色谱, 2013, (02): 151-154.

• 金属螯合亲和色谱
• 凝胶排阻色谱
• 增强型绿色荧光蛋白
• 分离
• 纯化 immobilized metal affinity chromatography(IMAC)
• gel exclusion chromatography(GEC)
• enhanced green fluorescent protein(EGFP)
• separation
• purification

增强型绿色荧光蛋白(EGFP)是生物领域常用的标记物。在前期成功克隆表达EGFP的基础上,本实验建立了两步分离纯化EGFP的色谱方法,并验证其分离纯化效果,检验EGFP的活性。首先用金属螯合亲和色谱柱His-Trap HP对EGFP的重组菌体破碎上清液进行初步分离,再用葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephadex G-10 HR对其进行脱盐纯化。采用丙烯葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephacryl S-300 HR和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测分离纯化后的EGFP纯度。最后通过荧光分光检测器和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)验证分离纯化后的EGFP是否具有荧光...

• 单位
  山东大学(威海)