产肠毒素大肠杆菌K88ac-STa-LTB嵌合抗原多克隆抗体制备及植物乳杆菌表面表达研究

作者：刘琼; 刘永仕; 尚晓敏; 李桂玲; 姜延龙^*; 王春凤^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2019, (01): 13-175.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.06.0171

• 植物乳杆菌
• 产肠毒素大肠杆菌
• 黏附素-肠毒素嵌合抗原
• 多克隆抗体
• 表面表达

为了研究植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,L.plantarum)表面表达黏附素-肠毒素(K88ac-STa-LTB)嵌合抗原的可行性,试验利用原核表达载体pET28a表达纯化此嵌合抗原,蛋白复性后免疫Babl/c小鼠制备多克隆抗体,以制备的多克隆抗体作为一抗,采用Western-blot、流式细胞术及间接免疫荧光试验研究此嵌合抗原在植物乳杆菌表面表达情况。结果表明:K88ac-STa-LTB嵌合抗原在大肠杆菌中以包涵体形式表达,纯化并复性的重组蛋白大小约为32.5 ku,制备的抗体效价为12lb。重组菌株NC8-pLP1261-8576表达的K88ac-STa-LTB嵌合抗原经Western-blot分析,能被鼠抗LTB单克隆抗体及自制的鼠抗K88ac-STa-LTB多克隆抗体识别,流式细胞术及荧光显微镜观察证明此嵌合抗原在菌体表面表达。

• 单位
  吉林工程技术师范学院; 吉林省动物微生态制剂工程研究中心; 吉林农业大学