基于S蛋白的犬冠状病毒间接ELISA检测方法的建立与应用

作者：曹海旭; 胡博; 李虹晔; 李昀真; 代昕宇; 张成琪; 李双双; 张海玲; 廉士珍; 白雪^*

来源：中国兽医科学, 2022, 52(05): 564-571.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0083

• 犬冠状病毒
• S蛋白
• 原核表达
• ELISA

旨在原核表达犬冠状病毒(CCoV)的刺突(S)蛋白,以此为包被抗原,通过优化条件建立CCoV血清抗体间接ELISA检测方法。首先,将CCoV的S基因序列克隆至原核表达载体pColdⅠ中,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达。Western-blot验证蛋白大小约为28 ku,纯化后作为包被抗原,通过优化条件建立检测CCoV抗体的间接ELISA,抗原包被最佳质量浓度为4μg/mL;待检血清稀释度为1∶160时D450最高;酶标抗体最佳稀释度为1∶3 000;TMB最佳显色时间为20 min;最佳封闭液为50 g/L脱脂奶粉溶液;阴阳性临界值为D450=0.214;与犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬腺病毒的阳性血清均不发生交叉反应,表明特异性好;批内变异系数最大值为4.531%,批间变异系数最大值为2.908%,表明重复性好;该方法能检测到640倍稀释的血清,表明敏感性较高。应用该方法对161份临床犬血清进行检测,发现阳性率为98.7%,说明CCoV的感染率较高。本研究为CCoV抗体检测提供了有效工具。

• 单位
  中国农业科学院特产研究所