血液肿瘤中NPM1突变基因的载体构建及表达分析

作者:彭晨阳; 任安琦; 李婉蓉; 武福云; 陈义芝*
来源:湖北医药学院学报, 2023, 42(01): 11-2.
DOI:10.13819/j.issn.2096-708X.2023.01.003

摘要

目的:NPM1基因突变导致多种类型的血液肿瘤,其中最常见的是NPM1突变导致急性髓系白血病(AML)及间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)。构建这两种最常见的NPM1突变基因真核表达载体并分析其表达情况,对于研究NPM1突变与血液肿瘤发生的关系具有重要意义。方法:设计NPM1突变基因引物,通过重叠PCR扩增基因片段,并插入到pEGFP-N1载体,构建GFP-NPMc+及GFP-NPM-ALK真核表达载体;转染GFP-NPM1突变载体到HEK293T细胞,荧光显微镜观察突变蛋白细胞定位情况;免疫印迹检测NPM1突变蛋白过表达对相关细胞信号通路的影响。结果:双酶切实验显示GFP-NPMc+和GFP-NPM-ALK真核表达载体构建成功;荧光显微镜观察显示NPMc+和NPM-ALK突变蛋白均主要定位于细胞质;免疫印迹结果显示NPM1突变能够激活PKC和ERK等信号通路。结论:成功构建了血液肿瘤中最常见的NPM1突变基因表达载体,并通过NPM1蛋白细胞定位的分析,我们认为NPM1突变蛋白共有的组成结构域NPM-N端可能在各种血液肿瘤发生中发挥重要作用。

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