不同缺氧条件对小鼠骨髓基质细胞成分组成和细胞分化的影响

作者：任红英; 赵钦军; 王彤; 程雪莲; 程涛

来源：山东医药, 2015, 55(02): 20-23.

DOI：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.02.007

• 缺氧
• 骨髓基质细胞
• 细胞分化

目的观察不同缺氧条件对小鼠骨髓基质细胞(BMSC)成分组成的影响。方法 Balb/c小鼠15只脱颈处死,取双侧股骨,分离BMSC接种于T25培养瓶中。将细胞随机分为对照组、缺氧1组、缺氧2组、氯化钴组。各组细胞分别以低密度(5×102/cm2)、中密度(1×104/cm2)、高密度(1.5×106/cm2)接种于培养基。对照组置于常氧条件(37℃、5%CO2、21%O2)培养,缺氧1组于2.5%4%O2、5%CO2、91%92.8%N2条件下培养,缺氧2组置于7%8%O2、5%CO2、87%88%N2条件下培养。氯化钴组在培养基中加入氯化钴100μΜ/L。各组细胞培养7 d后观察结果。光镜及透射电镜下观察BMSC细胞形态和超微结构变化,免疫组化法检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)表达,RT-PCR法检测OCT4及内皮细胞相关基因(VEGF、FLT-1、FLK-1)表达。结果对照组以梭形成纤维样细胞为主,少有细胞融合现象;缺氧1、2组出现较多个体较大、扁平而宽阔的骰子样细胞;氯化钴组细胞呈圆形,个体较小。缺氧1组BMSC增殖率高于缺氧2组;中密度接种细胞增殖率最高;氯化钴组细胞增殖受到明显抑制。缺氧1、2组ALP染色阳性细胞多于对照组及氯化钴组,且缺氧1组高于缺氧2组(P均<0.05)。缺氧1、2组OCT4基因表达受到抑制,仅对照组及氯化钴组OCT4基因表达阳性。VEGF在缺氧1、2组表达均为阴性,而在氯化钴组表达阳性;各组FLK-1基因表达均为阳性;FLT-1基因表达均为阴性。结论在2.5%4%O2、1×104/cm2接种密度条件下,小鼠BMSC中一种分化程度较高、宽阔、扁平、ALP表达阳性的细胞比例进一步增高。

• 单位
  中国医学科学院血液学研究所; 实验血液学国家重点实验室