ACE2-mCherry融合基因表达载体的构建及功能验证

作者：蒋晓祎; 侯欣妤; 张波; 任禾; 牛祖彪; 郑幽; 王雨琪; 孙强; 黄红艳^*

来源：生物技术通讯, 2020, 31(06): 675-680.

• 血管紧张素转化酶2
• 同源重组
• SARS-CoV-2

目的:构建带有荧光标记的血管紧张素转化酶2(ACE2)表达载体,并初步验证该表达载体的功能。方法:采用PCR方法,从载体pcDNA3.1-ACE2-3xFlag中扩增得到目的基因片段ACE2,用限制性内切酶XhoⅠ和AgeⅠ对载体质粒pQCXIP-mCherry-Lamp进行双酶切,回收得到线性化载体后与扩增的ACE2片段同源重组,得到目的载体pQCXIP-ACE2-mCherry。测序成功后,将构建的pQCXIP-ACE2-mCherry重组质粒及表达SARS-CoV-2的S蛋白的质粒pSec-SARS-CoV-2-S同时瞬时转染293T细胞,48 h后通过活细胞拍摄观察胞膜融合现象,Western印迹检测蛋白表达。结果:构建了表达人ACE2蛋白以及荧光标记蛋白mCherry的真核表达载体pQCXIP-ACE2-mCherry,与pSec-SARS-CoV-2-S共转染293T细胞后胞膜发生融合。结论:通过同源重组技术构建了载体pQCXIP-ACE2-mCherry,其研究思路可供SARS-CoV-2病毒研究借鉴。

• 单位
  首都医科大学附属北京世纪坛医院