自身淬灭荧光定量PCR检测慢性粒细胞白血病bcr/abl mRNA

作者：彭辉; 冯文莉; 王小中; 曾建明; 肖青; 潘健; 曹唯希; 罗云萍; 黄宗干

来源：中华检验医学杂志, 2007, 30(11): 1227-1231.

DOI：10.3760/j.issn:1009-9158.2007.11.008

• 聚合酶链反应
• 自身淬灭探针
• 白血病,粒细胞,慢性期
• bcr/abl 融合基因

目的利用自身淬灭探针技术建立一种能检测慢性粒细胞白血病(CML)bcr/abl 融合基因 mRNA 的实时荧光定量 PCR 方法,为 CML 的诊断、疗效观察以及微量残留白血病(MRD)的监测提供有效手段。方法用逆转录 PCR 方法(RT-PCR)扩增 K562细胞的 bcr/abl 融合基因,A-T 克隆法构建定量标准模板;设计自身淬灭荧光引物(探针),建立自身淬灭荧光定量逆转录 PCR 方法(FQ-RT-PCR),并对该方法的线性检测范围、灵敏度、重复性、稳定性进行检测;然后检测临床白血病患者骨髓标本 bcr/abl mRNA。结果建立的 FQ-RT-PCR 方法可检测10 copies/μl的 bcr/abl 重组质粒,并能从10~5个正常细胞中检出1个白血病细胞,该方法的批内、批间变异系数(CV)分别为2.1%、6.1%,线性检测范围为10~2～10~9copies/μJ。25例 CML 患者 bcr/abl 融合基因 mRNA 表达量中位数为4.50×10~4[(0.45～89.00)×10~4]copies/μg RNA,其中11例慢性期初诊患者 bcr/abl mRNA 表达量中位数为5.45×10~4[(2.95～19.30)×10~4]copies/μg RNA,6例急变期患者 bcr/abl mRNA 表达量中位数为13.00×10~4[(4.10～89.00)×10~4]copies/μg RNA,8例慢性期治疗后复查患者 bcr/ablmRNA 表达量中位数为2.35×10~4[(0.45～5.12)×10~4]copies/μg RNA,CML 急变期患者 bcr/abl 融合基因表达水平与慢性期患者之间差异有统计学意义(q=3.41,P<0.05)。PCR 产物经电泳分析,其中21例 CML 患者为 b3a2型,4例 CML 患者为 b2a2型;3例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中,1例有 bcr/abl mRNA 表达,为 b2a2型。结论所建立的基于自身淬灭探针技术的实时荧光定量 PCR检测方法灵敏、特异、重复性好,结果用拷贝数表示,准确可靠,利于标准统一。可广泛用于 CML 的诊断、疗效观察以及 MRD 的监测。

• 单位
  重庆医科大学; 重庆医科大学附属第一医院; 重庆医科大学附属第二医院