糖原合成酶激酶3β抑制剂CHIR99021诱导人胚胎干细胞分化为限定性内胚层细胞

作者：杜聪; 邱东波; 蔡楠; 王亚彬; 奉源; 张琪; 项鹏; 易慧敏

来源：中华肝脏外科手术学电子杂志, 2014, 3(03): 183-188.

DOI：10.3877/cma.j.issn.2095-3232.2014.03.013

• 胚胎干细胞
• 细胞分化
• 内胚层
• 糖原合成酶激酶3
• CHIR99021

目的探讨糖原合成酶激酶(GSK)3β抑制剂CHIR99021诱导人胚胎干细胞分化为限定性内胚层细胞的可行性。方法将人胚胎干细胞H1细胞置于无滋养层培养基(Essential 8)培养。采用免疫荧光法检测人胚胎干细胞多能性标志物Oct4、Nanog的表达。于细胞中加入0.33、1.00、3.00、9.00、27.00μmol/L浓度的CHIR99021培养3 d,以不加CHIR99021的细胞作对照。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞多能性相关基因OCT4、SOX2和限定性内胚层相关基因GATA4、SOX17的表达水平。实验数据比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。结果免疫荧光法能够检测到人胚胎干细胞多能性标志物Oct4、Nanog的表达。经0.33、1.00、3.00μmol/L CHIR99021处理后的人胚胎干细胞生长状态良好,CHIR99021浓度较高时细胞生长状态较差或死亡。经1.00、3.00μmol/L CHIR99021处理后的细胞多能性相关基因OCT4表达均下调(LSD-t=-40.54,-59.12;P<0.05),SOX2表达亦明显下调(LSD-t=-20.46,-3.87;P<0.05)。经1.00、3.00μmol/L CHIR99021处理后的细胞限定性内胚层相关基因GATA4表达上调(LSD-t=137.21,65.29;P<0.05),SOX17表达亦明显上调(LSD-t=50.93,6.56;P<0.05)。结论人胚胎干细胞应用无滋养层培养仍然保持良好的干细胞生物学特性。CHIR99021可以高效诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化。

• 单位
  中山大学附属第三医院; 中山大学