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摘要
为研究非洲猪瘟病毒（ASFV）p30蛋白的B细胞抗原表位，本研究制备了p30蛋白的单克隆抗体（mAb），并以该单克隆抗体为工具进行B细胞抗原表位定位。首先，通过原核表达及Ni柱亲和纯化获得p30蛋白，将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠进行杂交瘤细胞制备，通过间接酶联免疫吸附试验（iELISA）筛选出阳性杂交瘤细胞，并以细胞表达的方法制备单克隆抗体；采用间接免疫荧光试验（IFA）和蛋白质免疫印迹（Western blot）对单克隆抗体的特异性进行鉴定。利用IEDB表位预测软件对p30蛋白B细胞抗原表位进行预测，根据预测结果对CP204L基因进行截短表达，利用IFA、Western blot和iELISA对其抗原表位进行鉴定。最后，利用噬菌体十二肽库对制备的p30单克隆抗体进行四轮生物淘选，筛选多肽表位，并与上述基因截短表达筛选方法进行比对。特异性鉴定结果显示，该单克隆抗体能成功识别感染猪肺泡巨噬细胞的ASFV；基因截短表达筛选结果表明其识别的抗原表位区域为~(84)M～K~(142)；噬菌体淘选试验结果表明~(116)TSSFETLFE~(124)为本试验制备的单克隆抗体所识别的p30蛋白抗原表位核心序列，该结果进一步缩小了表位分布范围。本研究制备了p30蛋白的一株单克隆抗体，并对其抗原表位进行鉴定，为血清学诊断试剂的研发和p30蛋白功能研究奠定基础。
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