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摘要
目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)在肺癌放疗抵抗中的作用, 并观察lncRNA微小RNA(miR)-4453对肺癌放疗抵抗的影响。方法 H460细胞(大细胞肺癌细胞)购自上海中国科学院细胞研究所。应用梯度增加X射线剂量法对H460细胞反复照射, 剂量分别为前3次4 Gy, 中4次6 Gy, 后3次8 Gy, 累积剂量60 Gy。照射完成后放疗抵抗株命名为H460R细胞。通过高通量测序, 筛选出亲本株H460细胞与抵抗株H460R细胞差异表达的lncRNAs。利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术, 对H460细胞与H460R细胞差异表达的lncRNAs和mRNAs进行验证。对放疗抵抗细胞株H460R细胞分别转染干扰序列[小干扰RNA(siRNA)-miR-4453]和对照序列(siRNA-NC)。采用Transwell法分析H460细胞、H460R细胞、siRNA-NC细胞和siRNA-miR-4453细胞的迁移能力。采用流式细胞术分析siRNA-NC细胞和siRNA-miR-4453细胞凋亡比例。利用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测H460细胞、H460R细胞、siRNA-NC细胞和siRNA-miR-4453细胞放疗剂量的半数抑制浓度(IC50)值。组间比较采用t检验。结果放疗抵抗株H460R细胞的IC50值高于对照组H460细胞的IC50值[(28.580±4.181) Gy比(7.788±0.352) Gy, t=8.58, P<0.05]。H460R细胞株穿过Transwell膜的细胞数量高于对照组H460细胞的数量[(532.700±21.060)个比(220.000±14.150)个, t=11.09, P<0.05]。高通量测序结果表明, 在亲本H460和放疗抵抗株460R细胞中共检测到71个差异表达的lncRNAs和1461个差异表达的mRNAs。对H460R细胞敲除miR-4453后, 检测miR-4453在siRNA-NC对照组中的表达水平明显高于siRNA-miR-4453组[(0.032±0.008)比(0.001±0.000), t=6.860, P<0.05)]。对照组siRNA-NC细胞的IC50值高于干扰组siRNA-miR-4453细胞的IC50值[(29.240±1.640) Gy比(16.503±1.713) Gy, t=9.30, P<0.05]。对照组siRNA-NC细胞的迁移能力高于干扰组siRNA-miR-4453细胞的迁移能力[(611.700±26.850)个比(317.700±11.860)个, t=19.54, P<0.05]。对照组siRNA-NC细胞的凋亡低于干扰组siRNA-miR-4453细胞的凋亡[(6.593±0.157)%比(9.453±0.175)%, t=17.93, P<0.05]。结论亲本株与放疗抵抗细胞株的lncRNAs的表达差异有统计学意义。而lncRNA miR-4453表达水平的改变, 影响肺癌细胞的放疗敏感性及迁移能力。
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