阿糖胞苷对原代培养的大鼠海马和大脑皮层神经元生物学特性的影响

作者：戴嘉华; 孙卫文; 赖梅菁; 邱美茜; 张文浩; 徐恩; 詹丽璇^*

来源：广州医科大学学报, 2023, 51(06): 1-10.

• 海马和皮层神经元
• 原代培养
• 阿糖胞苷

目的：探讨阿糖胞苷（Ara-C）不同浓度、不同介入时间以及不同处理时长对原代培养的大鼠海马和大脑皮层神经元纯度及活性的影响。方法：取孕16～18 d的胎鼠海马及皮层组织进行原代神经元培养，培养后48 h分别加入浓度为0、2.5、5、7.5、10μmol/L的Ara-C处理24 h，检测不同浓度的Ara-C对原代神经元生物学特性的影响；培养后24、48、72、96及120 h，加入5μmol/L的Ara-C处理24 h，检测Ara-C不同介入时间对原代神经元生物学特性的影响；培养后48 h，加入5μmol/L的Ara-C处理0、6、12、24、48 h，检测Ara-C不同处理时长对原代神经元生物学特性的影响。培养后第8天倒置显微镜下观察细胞的形态及生长状况，免疫荧光检测微管相关蛋白2(MAP2)、神经纤维酸性蛋白（GFAP）的表达，并计算MAP2阳性细胞占细胞总数的比例。使用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测神经元细胞活性。结果：与对照组（0μmol/L）相比，Ara-C浓度为5μmol/L组海马神经元纯度达89.8%、细胞活性为48.6%。与对照组相比，种板后48 h加入Ara-C获得的海马神经元纯度为96.2%，细胞活性为44.8%。与对照组（0 h）相比，Ara-C处理12 h组获得的海马神经元的纯度为90.8%，细胞活性为47.5%。在大鼠原代培养的皮层神经元中，与对照组（0μmol/L）相比，给予不同浓度的Ara-C(2.5、5、7.5、10μmol/L)处理，原代皮层神经元纯度的差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组相比，给予不同介入时间（24、48、72、96、120 h）的Ara-C处理，皮层神经元纯度的差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组（0 h）相比，给予不同时长（6、12、24、48h）的Ara-C处理，仅Ara-C处理24 h后皮层神经元纯度稍增高（P<0.05）。结论：在大鼠原代海马神经元的早期培养过程中，种板后48 h加入5μmol/L Ara-C处理12 h得到的海马神经元的纯度与活性最佳，而在大鼠原代皮层神经元培养中无需添加Ara-C即可获得较高纯度和活性的神经元。

• 单位
  广州医科大学; 广州医科大学附属第二医院; 暨南大学; 神经内科