survivin启动子调控siRNA真核表达载体的构建及对HeLa细胞中stathmin基因的干涉作用

作者：王燕; 吴冰; 苏海川; 高萍; 林芳; 刘丽; 任继鸿; 赵辉; 张惠中

来源：现代肿瘤医学, 2007, 15(12): 1720-1723.

DOI：10.3969/j.issn.1672-4992.2007.12.007

• survivin启动子
• stathmin
• RNA干涉
• 真核表达载体
• HeLa细胞

目的:探讨survivin基因启动子调控的siRNA真核表达载体对HeLa细胞中stathmin基因表达的肿瘤特异性封闭作用.方法:合成针对人stathmin基因的siRNA cDNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHI和HindIII双酶切后的pSilencer4.1-CMV neo真核表达载体.PCR扩增suvivin基因启动子并测序,用EcoRI和BamHI分别双酶切,连接至经相同内切酶消化的载体,获得survivin启动子调控的siRNA真核表达载体,酶切及测序鉴定.脂质体法转染重组质粒入HeLa细胞,G418筛选.RT-PCR扩增stathmin基因,检测其对stathmin基因表达的干涉效果;流式细胞仪分析转染后HeLa细胞增殖周期的改变.结果:经酶切及测序鉴定,成功构建重组质粒;RT-PCR结果显示所构建的干涉载体可有效封闭stathmin基因表达;流式细胞仪分析结果显示,Hale细胞在stathmin siRNA作用下G2/M期细胞的比例明显增加.结论:survivin基因启动子调控的siRNA真核表达载体可有效地封闭HeLa细胞中stathmin基因表达并使HeLa细胞阻断于G2/M期,为以stathmin基因为靶点的恶性肿瘤生物治疗奠定了理论基础.

• 单位
  第四军医大学; 唐都医院