摘要
为了查明贵州省某鸡场40~50日龄海兰灰蛋鸡突然发病死亡的原因,试验采集病死鸡组织/器官进行细菌分离培养和PCR检测,并将阳性PCR产物克隆至pMD-19T载体中,通过PCR和双酶切鉴定克隆菌液,对鉴定正确的克隆质粒进行测序,并与GenBank中的参考毒株进行序列比对,分析其核苷酸序列同源性和遗传进化情况。结果表明:病死鸡肝脏质脆、边缘坏死,心包充满黄色积液,从组织中未分离出细菌。有2只送检鸡病料同时扩增出大小为433 bp、385 bp、800 bp的目的基因片段,检出禽白血病病毒(Avian leucosis virus, ALV)、禽腺病毒血清4型(Fowl aviadenovirus 4, FAdV-4)、禽腺病毒血清8a型(Fowl aviadenovirus 8a, FAdV-8a),成功克隆出ALV p27基因、FAdV-4和FAdV-8a Hexon基因。分离株ALV GZ-ALV-1/2株与ALV内源性E亚型亲缘关系最近,与ALV E-NSAC-1株(登录号为FJ793550)的核苷酸序列同源性最高,为91.8%~91.9%;分离株FAdV-4 GZ-4-1/2与GenBank中FAdV-4参考毒株的亲缘关系最近,与FAdV-4国内株LC1611株(登录号为MN316650)的同源性最高,为93.3%~94.6%;分离株FAdV-8a GZ-8a-1/2株与GenBank中FAdV-8a参考毒株亲缘关系最近,与澳大利亚TR59株(登录号为EU979374)和国内SDRZ株(登录号为MF198256)的核苷酸序列同源性最高,为98.6%~98.9%。说明送检蛋鸡病因为FAdV-4、FAdV-8a和内源性E亚型ALV的混合感染。
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单位贵州大学; 动物科学学院